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BD流式产品-同型对照产品介绍
干细胞搜网 / 2016-05-24

Becton Dickinson bioscience碧迪生命科学美国BD公司流式同型对照产品介绍

流式检测同型对照,最常用且最必须的阴性对照

BD流式检测同型对照常用产品及货号:BD556649,BD556652,BD556655,BD552916,BD551979

同型对照的主要目的是确定一抗的结合是特异性的,而不是非特异性的Fc受体或与其他蛋白的相互作用。还可以用来竞争性的结合抗体,与功能阻断抗体发挥同样的功能。同型对照要与一抗的来源,Ig分型和标记完全一致。  同型对照(Isotype Control):使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白,用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色。如果一抗是多抗,可以用(与一抗相同的正常血清)。同型对照为免疫荧光标记中的阴性对照。由于荧光标记单抗的组来源不同,应选用相同来源的未标记单抗作为同型对照来调整背景染色。举个例子:比如检测一抗为单抗的mouse anti rat CD11bclone OX-42 purified IgG,那么它的isotype mouse IgG2a, 所以可以用purified(纯化的) mouse IgG2a来做OX-42的同型对照(Isotype Control)。同型对照:是指与MoAb相同的、未免疫小鼠的免疫球蛋白亚类,若使用直接免疫荧光染色法,同型对照也应标记荧光色素,如IgG1 FITCIgG2a、PE等。主要考虑了细胞的自发荧光、FC受体介导的抗体结合和非特异性抗体结合等影响因素。此外,同型对照与MoAb所标记的荧光色素、浓度、FP比值(标记的荧光色素与免疫球蛋白分子的比值)应该相同为最佳,这对准确设定阴性与阳性细胞的界标有重要意义,切忌使用与MoAb不相匹配的同型对照,最好为同一实验室、采用相同工艺或方法制备(如同一品牌)的产品。

流式同型对照一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体,比如抗人的CD56 APC标记的抗体,成份是Mouse IgG1,κ。那么它的同型对照应该是APC标记的Mouse IgG1,κ。注意同型对照的成份跟它的名称是相同的.如果是抗体的组合形式是纯化的一抗+荧光标记的二抗,那么应该选择一抗的同型对照。比如CDw125的纯化抗体,成分是MouseIgG1,κ。它的同型对照是纯化的Mouse IgG1,κ。它的二抗PE标记的抗小鼠IgG1。那么染色方式如下:样本管:纯化的CDw25PE标记的抗Mouse IgG1+样本同型对照管:纯化的同型对照+PE标记的抗MouseIgG1+样本如果没有找到适合的同型对照,在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下,那么优先选择的顺序应该是亚链不同--亚型不同--相同类别。比如,某种的抗体的来源是Mouse IgG2а,κ。如果在同型对照表里面找到不到完全相同的同型对照,那么优先选择相同荧光标记的Mouse IgG2а为同型对照。如果也没有找到Mouse IgG2а,那么优先选择相同荧光标记的Mouse IgG2b作为同型对照。如果最后还是没有找到Mouse IgG2b,那么选者相同荧光标记的Mouse IgG2作为同型对照。  由于抗体与细胞间存在非特异性结合(如电荷间互吸等),流式抗体与细胞结合时有特异性结合部分和非特异结合部分,流式同型对照试剂 用于消除非特异结合所至非特异染色,严格来说,同型对照应该是同一抗原抗体制备的生产厂家,同一种属动物来源,同一种免疫球蛋白(包括亚型),同一荧光标记,作用类似调零(一般阳性率控制在1~2%内)。特别是多标调荧光补偿时,做为参考。 荧光素直接标记一抗:FITC标记为例:兔抗人的CD34/ FITC标记的抗体(荧光素直接标记一抗),抗体动物种属来源Rabbit IgG 抗体,它的同型对照应该是FITC标记的Rabbit IgG(亲和纯化IgG)。注意同型对照的成份跟它的名称是相同的。 使用标记一抗:Rabbit Anti-CD34/FITC 荧光素标记兔抗人CD34抗体IgG 同型对照: RabbitIgG/FITC 荧光素标记兔IgG 间接免疫荧光检测:PE标记为例 如果采用间接免疫荧光检测:一抗+荧光PE标记的二抗,抗体动物种属来源为小鼠抗人的CD4抗体+羊抗小鼠IgG/PE标记的二抗。它的同型对照应该是:亲和纯化小鼠IgG+羊抗小鼠IgG/PE标记的二抗。 Mouse Anti-Human CD4 Monoclonal Antibody 小鼠抗人CD4抗体 同型对照: Mouse IgG + Goat Anti-mouse IgG/PE 纯化小鼠IgG +羊抗小鼠IgG/PE标记的二抗。 

 设同型对照的目的   一、为什么要用同型对照?  同型对照是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白,用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色。同型对照是真正意思上的阴性对照,它不但可以用来设定流式细胞仪的电压,而且还可以帮忙省去昂贵与繁琐的重组细胞因子竞争封闭步骤。

 在流式细胞仪上样前,染色方式如下:样本管:一抗+样本,同型对照管:同型对照+样本二、如何选择同型对照?  (1)一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体,比如抗人的CD56 FITC标记的抗体,成份是MouseIgG1,κ。那么它的同型对照应该是FITC标记的MouseIgG1,κ。注意同型对照的成份跟它的名称是相同的.  (2)如果是抗体的组合形式是纯化的一抗+荧光标记的二抗,那么应该选择一抗的同型对照,比如CD86的纯化抗体,成分是MouseIgG1,κ。它的同型对照是纯化的Mouse IgG1,κ。它的二抗PE标记的抗小鼠IgG1,。那么染色方式如下:样本管:纯化的CD86PE标记的抗Mouse IgG1(二抗)+样本,同型对照管:纯化的同型对照+PE标记的抗MouseIgG1(二抗 )+样本.  (3)如果没有找到适合的同型对照,在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下,那么优先选择的顺序应该是亚链不同--亚型不同--相同类别。比如,某种的抗体的来源是Mouse IgG2а,κ。如果在同型对照表里面找到不到完全相同的同型对照,那么优先选择相同荧光标记Mouse IgG2а为同型对照。如果也没有找到Mouse IgG2а,那么优先选择相同荧光标记的Mouse IgG2b作为同型对照。如果最后还是没有找到Mouse IgG2b,那么选者相同荧光标记的Mouse IgG2作为同型对照。

哪些客户需要使用同型对照? A 对流式不是非常熟悉的客户。  B 做胞内流式客户,比如胞内细胞因子、趋化因子和信号蛋白等。  C 使用不常见的标志或者特异性不高的标志的客户,因为客户不熟悉不常见标志的表达情况,根据同型对照可以判断阳性细胞的位置。一些特异性不高的抗体,如多抗,非特异性结合非常多,使用同型对照可排除假阳性。  D 对流式非常熟悉又使用常用的表面标志的客户,一般可以不使用同型对照。

为什么有时候同型对照的表达会比抗体的表达高,首先需要检查同型对照的抗体是否加错类型、剂量等。其次,因为有些标志在细胞的表面或者胞内表达不高,而跟其类似的抗原非常多,那么加入同型对照时,同型对照非特异性的结合会超过抗体的特异性,所以会造成这种现象。这个时候推荐使用其他阴性对照,如空白对照等。

 

Becton Dickinson bioscience中国代理商:上海华雅思创生物科技有限公司

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BD流式抗体同型对照详见下表

产品编号

产品名称

规格

556649

FITC Mouse IgG1,  Isotype Control

50T

552834

PerCP-Cy5.5 Mouse IgG1  Isotype Control

50T

550854

APC Mouse IgG1  Isotype Control

50T

556652

FITC Mouse IgG2a, Isotype Control

50T

556655

FITC Mouse IgG2b,  Isotype Control

50T

552916

FITC Rat IgG1,  Isotype Control

50T

551979

PE Rat IgG1, Isotype Control

50T

560537

PerCP-Cy5.5 Rat IgG1, Isotype Control

0.1MG

554686

APC Rat IgG1, Isotype Control

0.1MG

 

 

 

 

BD公司流式产品中国代理商:上海华雅思创生物科技有限公司

    上海华雅思创生物公司的核心就是在中国代理各类生物类产品(涉及生物医药、生命科学研究、生物工程、疾病诊断、疫苗研发生产等等)的营销和服务工作。在中 国地区,中国代理商上海华雅思创生物公司起着重要的传递科学价值,服务科学研究。上海华雅思创生物公司在中国代理的生物技术类产品已经成功销往上海市、北 京市、重庆市、天津市、浙江省的杭州市、宁波、温州、江苏省的南京市、苏州、无锡、泰州、广东省的广州市、深圳市、珠海市、江西省的南昌市、四川省的成都 市、绵阳、湖南省的长沙、陕西省的西安市、杨凌、甘肃省的兰州、宁夏的银川、新疆的乌鲁木齐、广西省的南宁市、山东省的济南、青岛、东北三省辽宁省的沈阳 市、大连市、吉林省的长春市、黑龙江省的哈尔滨市等中国绝大部分省市和自治区。
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