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Rubicon Genomic最新单细胞基因测序产品和最新技术
干细胞搜网 / 2017-05-05

 

Rubicon Genomic最新单细胞基因测序产品和最新技术

1、RB3050  PicoPLEX WGA Kit 单细胞全基因组扩增试剂盒

【产品简介】

Rubicon Genomics RB3050/R30050PicoPLEX® WGA Kit 单细胞全基因组扩增试剂盒是应用于一般用途的Illumina下一代测序(NGS)的高性能文库PicoPLEX® WGA Kit 单细胞全基因组扩增试剂盒具有较低的和更广泛推荐的输入范围比其他工具包。对于Rubicon Genomics PicoPLEX® WGA Kit 单细胞全基因组扩增试剂盒样品输入量为20倍,比其他套件更为敏感,从第5050纳克,不需要协议或适配器浓度的优化。索引和适配器附带套件。

美国Rubicon Genomics---单细胞测序文库构建的领导品牌

1. 二代测序建库试剂(微量起始样品 50pg - 50ng

2. 单细胞扩增和单细胞测序建库试剂(广泛应用于生殖领域,是该领域的金标准。)

3. RNA扩增试剂 (微量起始样品,可以低至10个细胞的总RNA

 

【产品性能】


 

 

  

PicoPLEX® WGA Kit高性能的最低输入:50 PG 50纳克

PicoPLEX® WGA Kit完整的包,用于创

建库:优化索引和适配器试剂,酶,缓冲剂,和无核酸酶水

PicoPLEX® WGA Kit 其操作仅在一个管3步骤和仅2小时,没有必要调剂

1.可再生的单个细胞的结果(< 15 pg DNA)

2.优越的再现性等位基因的表示

3.RB3050/R30050PicoPLEX® WGA Kit 单细胞全基因组扩增试剂盒易于使用和自动化

4.RB3050/R30050PicoPLEX® WGA Kit 单细胞全基因组扩增试剂盒在所有分辨率、微阵列和PCR上都有明确的结果

 

产品应用

 研究领域  

PicoPLEX® WGA Kit 单细胞全基因组扩增试剂盒的适用范围十分广泛,多种原始材料和微量样品均可通过该试剂盒进行单细胞全基因组扩增

•生物标志物研究(CNVsSNVs •体外受精胚胎植入前基因测序           •转基因动物基因分型 

•胚胎和干细胞研究 •单精子分型 肿瘤 •体细胞遗传变异分析  •肿瘤进化和发展 

•肿瘤干细胞 •循环肿瘤细胞 细菌•宏基因组学研究 •微生物基因分型


【产品目前形势】

1.知名产品

WGA试剂盒

Sigma-Aldrich GenomePlex® Single Cell WGA Kit

Silicon Biosystem Ampli™ WGA Kit

NEB Single Cell WGA Kit

Qiagen REPLI-g Mini Kit

Qiagen REPLI-g Single Cell Kit

GE Healthcare illustra GenomiPhi V2 DNA Amplification Kit

Yikon Genomics Single Cell Whole Genome Amplification Kit

2.与其他产品的对比

性能

a.Rubicon PicoPLEX 单细胞全基因扩增试剂盒其操作仅在一个管3步骤和仅仅需要2个小时。而Sigma-Aldrich GenomePlex® 的单细胞全基因扩增试剂盒需要4个小时,更大地节约了时间,Sigma-Aldrich采用核苷酸引物PCR扩增(DOP-PCR);该技术的回收灵敏度较低。

b.Silicon Biosystem Ampli™单细胞全基因扩增试剂盒非常适合于在单细胞中的SNPsCNV的下游分析,其优惠扩增率低,而Rubicon PicoPLEX 单细胞全基因扩增试剂盒的应用范围较广。

C.Qiagen REPLI-g Mini Kit GE Healthcare illustra GenomiPhi V2 DNA Amplification Kit利用的是MDA技术,PicoPLEX 单细胞全基因扩增试剂盒利用的是MALBAC技术,相对比而言MALBAC以其产量高、基因组覆盖度高、等位基因脱扣率低、下游应用广泛等优点,逐渐脱颖而出,成为全基因组扩增技术中的主力军

d.Yikon Genomics 单细胞全基因扩增试剂盒:起始模板量低:单细胞,多个细胞,或纳克(ng)以下DNA扩增覆盖度高:高达93%扩增成功率高:扩增成功率96%单管操作,操作简单,4个小时完成扩增,同样相比Rubicon的单细胞全基因组扩增试剂盒所需时间更久。

价格:

产品编号

产品名称

单位

2017年目录价格(RMB)

RB3050

PicoPLEX WGA Kit

50Rxns

¥16,059

Sigma-Aldrich GenomePlex® Single Cell WGA Kit  ¥2,232,36

Silicon Biosystem Ampli™ WGA Kit  ¥ 3,396.51

NEB Single Cell WGA Kit   ¥13056.0

Qiagen REPLI-g Mini Kit   ¥8940.0

Qiagen REPLI-g Single Cell Kit   ¥9840.0

GE Healthcare illustra GenomiPhi V2 DNA Amplification Kit   ¥11467.50

Yikon Genomics Single Cell Whole Genome Amplification Kit  ¥16943.0

运送时间

目前公司现货

【快讯】

全基因组扩增实现97%覆盖率,遗传病基因变异检测更灵敏

科技日报417日电,最新一期《科学》杂志刊登了哈佛大学华人科学家陈崇毅课题组的突破性研究成果:一种名叫“转座子插入线性扩增”(LIANTI)的技术,首次实现了全基因组的线性扩增。
陈崇毅博士接受科技日报记者邮件采访时表示,这一全新技术能实现高达97%的单细胞基因组覆盖率,准确度超越了目前在用的所有扩增技术。
多次退火环状循环扩增技术(MALBAC)是目前最先进的全基因组扩增技术,能检测单细胞中较小的DNA序列变异,从而发现个别细胞之间的遗传差异。虽然该技术已经用于生殖医学临床,研究和测量胚胎细胞内的遗传变异来筛选健康胚胎,但也只能扩增单细胞中93%的基因组进行测序。
LIANTI技术是通过插入他们团队专门设计的一种转座子对单细胞内遗传物质扩增。转座子是一类可在基因组中转移位点的DNA片段,他们设计的新转座子含有一条19个碱基对双链转座酶和一条环状单链启动子,启动子启动转录过程后,线性扩增插入位点下游的DNA达到一定数量后即可进行测序研究。
他们对紫外线引起的人类细胞基因变异进行了扩增检测,结果表明,LIANTI首次实现单细胞基因组扩增97%准确率,高于目前最先进扩增技术MALBAC。陈崇毅表示,LIANTI减少了扩增噪音和错误,因此基因拷贝数的准确度非常高,比之前技术提高了3个数量级。另外,其测量基因组内单个碱基突变的灵敏度大大增强,这对单碱基突变导致的大量癌症与遗传病的研究和治疗具有重要意义。

【相关文献、技术】

1.Whole Genome Amplification for Single Cell Biology

2.Whole genome amplification from single cells in preimplantation genetic diagnosis and prenatal diagnosis

【单细胞全基因组扩增技术】

全基因组扩增WGA)是一组对全部基因组序列进行非选择性扩增的技术,其目的是在没有序列倾向性的前提下大幅度增加DNA的总量。其基本原理为:采用的多重置换扩增(MDA)技术,能对基因组DNA进行稳定的扩增。利用随机六碱基引物在多个位点与模板DNA退火,接下来在高扩增效率和保真性的Phi29 DNA聚合酶在DNA的多个位点同时起始复制,它沿着DNA模板合成DNA,同时取代模板的互补链。被置换的互补链又成为新的模板来进行扩增,因此最终我们可以获得大量高分子量的DNA

MALBAC即多次退火环状循环扩增技术,是基于哈佛大学谢晓亮院士研究组的一项专利技术,是目前最先进的全基因组扩增技术。

1)降低PCR扩增偏倚,使得单细胞中93%的基因组能够被测序。这种方法使得检测单细胞中较小的DNA序列变异变得更容易,因此能够发现个别细胞之间的遗传差异。这样的差异可以帮助解释癌症恶化的机制,生殖细胞形成机制,甚至是个别神经元的差异机制。 2)灵敏度高:单细胞、单染色体或0.5pg的基因组DNA即可进行扩增。 3)扩增均匀性显著优于其它技术

最新:eWGA利用微流控技术,将一个细胞的基因组片段分散在包含有几十万个皮升量级微型反应液滴的乳液中,其中每个液滴中含有约一个待扩增的DNA片段和用于等温多重置换扩增(MDA)的其他原料。对整个乳液体系进行等温扩增时,每个分隔的液滴内都在进行独立的扩增反应。这些独立的反应之间虽然在动力学上存在显著的差异,但是在这一受限体系内可以相继达到饱和。这样,每个片段的扩增比起传统的MDA反应,在均匀性上得到了显著的改善,同时由于使用了高保真度的聚合酶还可以保证扩增结果的高度准确性。实验结果表明,eWGA方法超越了以往的的单细胞扩增方法,提供了更好的扩增均匀性、更完整的基因组覆盖率和最好水平的复制准确率,无需矫正即可准确检测单个细胞中尺寸更小的CNV并同时实现高精度的SNV检测。将该方法应用于单个癌症细胞中的CNV检测,最高尺寸分辨率可以达到250kb。此外,该方法兼容常见的序列富集方法如外显子富集,具备广阔的医学诊断应用前景。综合考虑,eWGA使得从一个单细胞出发的精确CNVSNV检测成为可能,是目前最好的单细胞全基因组扩增技术

2PicoPLEX DNA-seq Kit  单细胞测序试剂盒

RB3381  PicoPLEX DNA-seq Kit

RB4406  ThruPLEX DNA-seq 48D Kit

RB4407  ThruPLEX DNA-seq 96D Kit

RB4427  ThruPLEX DNA-seq 48S Kit

RB4428  ThruPLEX DNA-seq 12S (48)Kit

RB4523  ThruPLEX DNA-seq 6S (12 )Kit

 

【产品简介】

 PicoPLEX DNA-seq Kit工具包基于创新ThruPLEX化学生成DNA50 pgDNA并增加灵敏度,同时提供96指标多路复用。这个工具可以用于从任何示例源——基因组DNA片段,FFPE 材料,游离DNAcDNA。整个ThruPLEX DNA-seq工具包工作流程:执行在一个管或在约2小时,不需要纯化步骤或样品转移。套件包含12,4896

ThruPLEX DNA-seq技术

ThruPLEX技术是3步反应开始支离破碎的双链DNA(0.05 ng 50 ng)在一种高效修复过程。背景是减少使用双链适配器没有单链的尾巴。平端连接发生与高效。阻塞5 'ends减少adaptor-adaptor。通过在结扎后破坏未使用的适配器,进一步减少了背景。

【产品性能


 

最低输入的高性能:50-50-ng

完整的包创建库:优化索引和适配器试剂、酶、缓冲区,nuclease-free

快速简单的工作流程:在一个管道内的3个步骤,或者在2小时内,没有必要的传输

兼容主要目标浓缩平台:安捷伦SureSelect®,罗氏罗氏®SeqCap®EZ,IDT xGen®锁定®探针

工作流ThruPLEX DNA-seq工具包

开始只要50 pg的破碎的双链DNAcDNAThruPLEX DNA-seq工具包在3个简单的步骤:创建索引库维修结束,适配器结扎和高保真图书馆放大。流线型的工作流程可以防止样品丢失,在一个管道内大约2小时内进行,或者防止样品丢失,并提高样品的识别。


【产品目前形势】

市场上测序公司分为产品类企业和服务类企业。服务业除去个别已经建立一定专业门槛的企业,大部分都是比拼成本和资金,上游对其制约较强,因此国产自主产品需求愈发强烈。

产品类主要指上游测序仪器和试剂的开发、制造和销售。全球被IlluminaLifeQiagen垄断。由于测序产品技术门槛高,国产研发实力尚无法自主研制,主要通过以下两种方式报批并销售:

1.进口品牌贴牌注册,如达安基因、贝瑞和康(ST-天仪)、安诺优达等,分别贴牌两巨头的测序仪器;

2.收购获取技术和产品,如华大基因收购CG,获得所有技术和产品专利;

3.少量自主研发产品,目前医院较少见到,其性能还有提升空间。

拥有上游产品,对于未来基因测序市场有了决定性的话语权。Rubicon作为体外诊断行业优秀的龙头企业,深度布局基因检测,是实验室整体解决方案战略的必备高净值产品Rubicon Genomics开发创新、高品质的、核酸文库的制备及配套产品,能够对临床样本进行简单、快速可靠和高灵敏度的分析。

Rubicon Genomics开发创新、高品质的、核酸文库的制备及配套产品,能够对临床样本进行简单、快速可靠和高灵敏度的分析。

相比较,PicoPLEX DNA-seq简化DNA文库制备流程;整个过程是在一根管或孔内完成--减少错误和污染,加快反应过程,降低成本。

ThruPLEX Plasma-seq

1RB4490  ThruPLEX Plasma-seq 12S Kit

2、RB4491  ThruPLEX Plasma-seq 48S Kit

3、RB4492  ThruPLEX Plasma-seq 96D Kit

【产品简介】

ThruPLEX等离子体SEQ套件文库以高效率捕获并与激酶组用于突变检测的深覆盖所产生的数据。在5毫微克,6.5纳克,一式三份10毫微克的操作量从3血浆样品制备的库,和有针对性的测序使用与ClearSeq人类DNA激酶组小组SureSelectXT2丰富的样品进行了上IlluminaMiSeq。平均而言,5M分别读取每个库生成的。

ThruPLEX Plasma测序试剂盒,用于无细胞DNA的Illumina NGS制备,ThruPLEX等离子-SEQ套件创建了3个简单的步骤索引库:末端修复,接头连接,以及高保真库放大。不需要净化或样品转移步骤。流线型的工作流程在2个小时的单管或表现良好,防止样品的损失,提高阳性样品鉴定。 ThruPLEX等离子-SEQ套件技术 ThruPLEX等离子-SEQ套件技术 ThruPLEX等离子体SEQ套件技术是为无细胞的DNA进行了优化的3步反应。无细胞的DNA(1ng至30毫微克)首先在一高效率的处理修复。背景是使用无单链尾双链适配器减小。阻止5'端减少适配器适配器连接。
多样性最高,最少的未映射的无细胞DNA读取

优秀的靶向序列捕获Peformance

重现性好,无偏GC覆盖

卡罗林斯卡研究所CRUK评估

ThruPLEX等离子-SEQ套件单管工作流程

多样性最高,最少的未映射的无细胞DNA读取

具有很高的多样性和低数量的重复和未映射ThruPLEX等离子-SEQ套件产生质量库读取。

 

 

【产品形势】

    液体活检含有游离DNAcfDNA)发现血液循环中的血浆成分分离。它一直是在科学界的新的关注,最近由于容易获得的遗传信息,可以通过以下方式获得下一代测序。两个地方cfDNA测序正在使用是肿瘤学和NIPT。循环肿瘤DNActDNA)来自恶性肿瘤往往是在cfDNA发现,变化的数量和组成在进展,治疗,和耐药性的发展。测序的方法目前正在评估作为一种针对治疗转移性癌症的遗传演化监测。另一个使用涉及cfDNA检测胎儿染色体非整倍体和其他异常在从孕妇血浆分离。检测方法可以消除利用发展更具侵入性的程序,如羊膜穿刺术。

Rubicon基因最近开发出一种文库制备试剂盒,thruplex®等离子体SEQ,这是专门为优化方法在输入电平小于1毫微克至30毫微克。这thruplex产品线的新成员,能够为公司®NGS平台转化为高复杂度的方法库。三步单管流程产生索引库2小时内从纯化的方法。

推出thruplex血浆测序试剂盒。这些工具被用来在三个简单的步骤创建Illumina NGS文库。该研讨会将涵盖以下主题:

NIPT与肿瘤细胞DNA中的使用

thruplex技术和冲击性能变化的方法

•创造一个thruplex等离子体序列库

•目标富集血浆thruplex序列库

【快讯】

PGDx公司的ctDNA检测产品:PlasmaSELECT 64目前,Illumina、塞默飞、FMI等公司均在研发ctDNA检测。如Illumina公司在2015年投资4000万美元的Grail 公司,据FastCompany报道,近期有望完成一笔17亿美元的融资该公司计划,以在英国开展涉及50万人的大型ctDNA临床试验,目的正是为了划定正常人的ctDNA基线,从而开发设计出肿瘤早筛产品。   实际上,基因测序服务并非大家通常所理解的仅仅是测序,这只是其中的一步。整个过程实际上包括:样本处理(提取、建库及捕获),上机测序,架构算法及数据处理,医学注释对应解读及问题解决。

在这四个步骤中,除了上机测序只需要买illumina等公司的测序仪直接测,没有什么壁垒之外,其他三个步骤各公司之间差异大,均可形成壁垒。

以肿瘤的ctDNA检测为例,因为血液中的ctDNA含量低,捕获技术显得尤为重要。目前主要的方法有罗氏旗下的NimbleGen2014年发布的CAPP-seq技术,以及约翰·霍普金斯PGDxBert教授发明的Safe-SeqS技术,文后附参考文献。目前市场上做ctDNA的公司基本都是采用这两种技术。另外,贝瑞和康的cSMART捕获技术仅用于NIPT,还没有应用于肿瘤的文献及报道。上面两种技术虽然已经公开报道,但是每个公司的实验室掌握情况可能并不相同。 据我们调研的一家公司,他们在做ctDNA检测时,捕获技术的实验摸索就花了一年多的时间,对分子实验团队的要求比较高。架构算法方面,虽然有传统的开源算法可以模仿,但这些算法最开始主要应用于科研领域,准确度方面还有很大的提升空间,因此需要专业的生物信息团队进行优化提升。因为在测序的医疗应用方面,精准的要求是首要的,即患者基因有什么样的变化,数据必须百分百的准确得到。从测序仪测序得到的原始数据,需要后期经过基因组的比对,数据的过滤筛选等多个步骤才能得到基因组上的变异信息,从而为疾病的诊断和治疗提供参考。基因数据分析和解读也是基因测序服务的关键环节。高水平的医疗级基因测序服务公司仍然是投资市场上的稀缺。

【相关文献、技术】

Non-invasive whole genome sequencing of a human fetus Jacob O. Kitzman1,* , Matthew W. Snyder1, Mario Ventura1,2, Alexandra P. Lewis1, Ruolan Qiu1, LaVone E. Simmons3, Hilary S. Gammill3,4, Craig E. Rubens5,6, Donna A. Santillan7, Jeffrey C. Murray8, Holly K. Tabor5,9, Michael J. Bamshad1,5, Evan E. Eichler1,10, and Jay Shendure1,* 1Department of Genome Sciences, University of Washington, Seattle, Washington, USA 2Department of Biology, University of Bari, Bari 70126, Italy 3Department of Obstetrics and Gynecology, University of Washington, Seattle, Washington, USA 4Division of Clinical Research, Fred Hutchinson Cancer Research Center, Seattle, Washington, USA 5Department of Pediatrics at University of Washington School of Medicine, Seattle, Washington, USA 6Global Alliance to Prevent Prematurity and Stillbirth, an initiative of Seattle Childrens, Seattle, Washington, USA 7Department of Obstetrics and Gynecology, University of Iowa Hospitals and Clinics, Iowa City, Iowa, USA 8Department of Pediatrics, University of Iowa, Iowa City, Iowa, USA 9Treuman Katz Center for Pediatric Bioethics, Seattle Childrens Research Institute, Seattle, Washington 10Howard Hughes Medical Institute, Seattle, Washington, USA

ThruPLEX Tag-seq 

1RB4584  ThruPLEX Tag-seq 6S12Kit

2RB4585  ThruPLEX Tag-seq 48S Kit

3RB4586  ThruPLEX Tag-seq 96D Kit

【产品简介】

thruplex标签序列结合thruplex化学分子标记构建的分子标记和样本索引Illumina NGS文库。每个试剂盒包含超过1600万个独特的序列用于标记个别DNA片段扩增之前,提供跟踪的片段,通过库准备,目标富集和数据分析过程中检测低频等位基因或计数个别片段。的thruplex化学工程和优化产生高度多样化的图书馆具有重复性序列的性能从150 ng DNA。整个三个步骤的工作流程发生在一个单一的管或在约2小时。没有中间的纯化步骤和没有样品转移是必要的,防止处理错误和丢失有价值的样品。thruplex标签测序试剂盒包括所有必要的试剂包括复用到96样本指标。

基因表达标签测序(Tag profiling)技术是基于lllunina高通量测序平台的全基因组表达谱研究技术。其原理是使用每个转录本3’端一段特定的21bp标签序列来表征相应转录本的表达水平,利用lllumina高通量测序技术获得测序文库中所有标签的序列信息,进一步通过生物信息学分析比对,鉴定这些标签序列所代表的基因表达水平存在的差异。相对于传统的2杂交技术的基因芯片分析平台,基因表达标签测序能够提供更加精确的数字化信号,更高的基因表达数据检测通量以及更广的检测范围。同时,由于不需要预先针对已知序列设计探针,它能够直接用于任何物种的全基因组表达谱分析,在检测未知转录本,稀有转录本以及反义转录本等方面具有无可比拟的优势

【产品性能】

thruplex标签测序技术提供了高达1600万的分子标记测序正确错误提供自信的变异检测。

发现更多,成本有效。使用基于杂交的目标富集系统来检查数百个基因,包括突变和结构变异,同时。

高质量的通量的测序每次,无与伦比的易用性降低了用户的错误和污染我们的单管,2小时、3步骤的工作流。

节省时间的生物信息解决方案。达到的结果与基于云的软件很快从古玩基因组或开源脚本可用于数据处理。

珍贵的样品走得更远。使用较少的DNA来分析样本,一旦过低,以检测。thruplex标签序列与输入量从1毫微克至50毫微克cfDNA或支离破碎的DNA以适应很宽范围的样品。

欢迎您致电 上海华雅思创生物科技有限公司  

电话 023-63419626  手机号:18375916556   客服QQ: 2415014378

 

【产品形势】

Thermo Fisher Scientific(赛默飞)公司发布了一款仅限于研究使用的液体活检检测产品——Oncomine Lung cfDNA Assay,该产品基于标签测序(tag sequencing)技术开发,在ThermoIon S5系统上运行,但并不使用AmpliSeq试剂进行靶向扩增。新方法依赖于分子标记和一个两步扩增过程,以确保检测极限达到0.1%

目前的液体活检检测产品和检测仪器较多,而tag试剂检测盒虽说运输方便,但是其运用领域有限,只适用于科研。

【快讯】

多聚组氨酸标签(HIS-Tag)ELISA检测试剂盒

中国教育装备采购网

多聚组氨酸标签(HIS-Tag)ELISA检测试剂盒检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被 多聚组氨酸标签(HIS-Tag)捕获抗原的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 多聚组氨酸标签(HIS-Tag)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪(450nm2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL2-20uL20-200uL200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。3. 预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成名称 96孔配置 48孔配置 备注微孔酶标板 12×812×4条 无标准品(200 ng/L0.5mL 0.5mL 按说明书进行稀释标准品稀释液 6mL 3mL 按说明书进行稀释样本稀释液 6mL 3mL 按说明书进行稀释检测抗体-HRP 10mL 5mL 20×洗涤缓冲液 20mL 20mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无终止液 6mL 3mL 无封板膜 22张 无说明书 11份 无自封袋 11个 无注:标准品用标准品稀释液依次稀释为:200100502512.50ng/L.试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按120稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。2. 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃2. 设置标准品孔、样本孔和空白孔,空白孔什么都不加;标准品孔各加不同浓度的标准品50μL3. 待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL4. 随后标准品孔和样本孔中(空白孔不加)加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体50μL,,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。6. 所有孔加入底物AB50μL37℃避光孵育15min7. 所有孔加入终止液50μL15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断 绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。 试剂盒性能1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.99002. 灵敏度:最低检测浓度小于0.1 ng/L3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。6. 有效期:6个月7. 检测范围:6.25 ng/L -200ng/L免责声明1. 试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或 体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作,不同批号不可交换使用,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。

【测序技术】


 1代测序技术

1954 年 ,W hitfeld等用化学降解法测定多聚核糖核苷 酸序列是关于DNA测序技术的较早报道 。1977年 ,Sanger 发明 D N A 双脱氧核苷酸末端终止测序法Sanger测序法的原理如下 :每一DNA测序反应都由4个独立反应组成,由于DNA双链 中核苷酸 以 35 一磷酸二酯 键相连 。因此在测序过程中掺 入 23 一双脱 氧核 苷三磷 酸——ddNTP (不含 3 O H )。当 ddNTP位于DNA 双链的延伸末端时 ,无羟基3端不能与其他脱氧核 苷酸形成 3 5 一磷 酸二酯键,因此DNA双链合成便终止,若在终止位点掺入ddATP,则新生链末端为 A ,若掺人ddTrP ddCTP ddGTP ,相应地新生链末端 TC G。该测序技术的具体做法如下:将模板引物 4 dNTP (其 中含有一种为放射性 同位素标记的核苷酸 )DNA聚合酶共同保温 ,形成的混合物包含许多长短不一的片段 ,最后利用聚丙烯酰胺 变性凝胶电泳 (SDSPAGE )分离该混合物物,得到放射性同位素 自显影条带图谱人们依据凝胶电泳图即可读出DNA双链的碱基序列组成。Sanger测序技术操作快速简单,因此应用较广泛。

因一代测序技术通量较低无法满足更高要求的研究工作,所以经过不断的技术开发和改进,以Roche公司的454技术、illumina公司的Solexa,Hiseq技术和ABI公司的Solid技术为标记的第 二代测序技术诞生了。第二代测序技术**降低了测序成本的同时,还大幅提高了测序速度,并且保持了高准确性,以前完成一个人类基因组的测序需要3年时间, 而使用二代测序技术则仅仅需要1周,但在序列读长方面比起第一代测序技术则要短很多。目前全球保有量最大的二代测序仪是Illumina公司的Solexa和Hiseq,其核心原理是:利用超声波打断DNA进行文库构建,桥式 PCR扩增与变性,然后利用边合成边测序的方法进行测序。

PacBio公司的SMRT纳米孔单分子测序技术,被称之为第三代测序技术。与前两代相比,最大的特点就是单分子测序,测序过程无需进行PCR扩增。基本原理是: DNA聚合酶和模板结合,4色荧光标记 4 种碱基(即是dNTP),在碱基配对阶段,不同碱基的加入,会发出同光,根据光的波长与峰值可判断进入的碱基类型

三种技术的比较

20171月,Rubicon GenomicsInc.成为Takara Bio的一员,现在宝日医生物技术(北京)有限公司(Takara Bio北京分公司)开始在国内销售Rubicon公司开发的下一代测序试剂。Rubicon公司成立于2000年,公司总部位于美国密歇根州。Rubicon公司开发的产品主要基于ThruPLEX®技术”和“PicoPLEX®技术”,可以微量DNA起始构建下一代测序文库。ThruPLEX®技术”可从血浆中的微量游离DNA构建高多样性文库,准确检测低丰度DNA变异,用途广泛。PicoPLEX®技术”,可从单细胞等微量DNA起始构建高重复再现性文库,用于拷贝数变异分析和染色体异倍性分析。Rubicon产品丰富了Takara基于SMART®专利技术的下一代测序产品线,为科研工作者在基因组学、单细胞和临床应用研究等领域提供更多解决方案。代表产品之一为:Rubicon Genomics RB3050/R30050 PicoPLEX® WGA Kit 单细胞全基因组扩增试剂盒Whole Genome Amplification from Single Cells

 

2016年年底,TAKARA宝日医生物技术(北京)有限公司的市场部部长与宝生物工程(大连)有限公司的销售部部长分别从北京和大连飞往上海,对华雅再生医学的旗舰营销公司:红荣微再(上海)生物工程技术有限公司进行了实地考察,双方深入地探讨了未来干细胞及再生医学市场发展的趋势和方向,在双方公司中长期发展战略上,志同道合地看好再生医学市场的发展前景,历史性的医疗革命是我们这代人肩负的伟大使命!

TAKARA公司日本总部是:“iPS干细胞之父”诺贝尔奖获得者的故乡,具有全球最前沿的iPS干细胞技术实力,TAKARA公司旗下的Cellartis子公司,拥有超过40人的研发团队,拥有超过15年的人干细胞研究经验,建立并储存大量的人iPS和ES细胞系。TAKARA旗下的Stem Cells公司SC Proven系列:凭借20多年干细胞技术经验研发,包括干细胞研究用培养基、抗体等耗材,具有庞大的客户群(美国、欧洲、日本)。

2017年TAKARA宝生物日本总部又收购了:美国Rubicon Genomics单细胞测序文库构建的领导品牌,代表性产品之一为:Rubicon Genomics RB3050/R30050 PicoPLEX® WGA Kit 单细胞全基因组扩增试剂盒Whole Genome Amplification from Single CellsThruPLEX® Plasma-seq KitThruPLEX® DNA-seq KitPicoPLEX® DNA-seq KitPicoPLEX® WGA Kit TransPLEX® C-WTA Kit.

其中部分产品红荣微再常备现货,欢迎来电咨询。

 

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